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體外哺乳動(dòng)物細胞染色體畸變試驗儀

一、 儀器介紹

實(shí)驗目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養的哺乳動(dòng)物細胞染色體畸變,以評價(jià)受試物致突變的可能性

實(shí)驗概述：

在加入和不加入代謝活化系統的條件下,使培養的哺乳動(dòng)物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預示著(zhù)有染色體數目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數目畸變。

應用范圍

應用于科研、農業(yè)、衛生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個(gè)領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學(xué)試驗方法第19部分:體外哺乳動(dòng)物細胞染色體

畸變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養

選擇合適細胞系，在含血清培養基中培養至對數生長(cháng)期。

2）受試物處理

設置多個(gè)濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長(cháng)抑制濃度）

陽(yáng)性對照（如環(huán)磷酰胺等已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝活化系統（S9混合液）

模擬體內代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4.）采樣時(shí)間

短期處理:1個(gè)細胞周期（通常24小時(shí)，含或不含S9）

長(cháng)期處理:覆蓋多個(gè)細胞周期（如48小時(shí)）

5）染色體制備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸=3:1）后滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀(guān)察至少200個(gè)中期分裂相，記錄畸變類(lèi)型和頻率。

三、儀器與試劑

關(guān)鍵儀器：

培養箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析系統）

染色體自動(dòng)掃描儀（可選）

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清、胰蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。